Localizacion celular biologia
Contents:Necesitamos anticuerpos anti-actina hechos en otro animal por ejemplo en conejo. Tenemos dos anticuerpos primarios; anti-actina de ratón y anti-tubulina de ratón ambas hechas en conejo. Los anticuerpos primarios los hacemos en dos especies diferentes para que sus regiones Fc sean diferentes, por ejemplo, antiactina hecha en conejo y antitubulina hecha en cabra.
La solución es hacer que la reacción anti-[actina]anti-[IgG] sea permanente usando un fijador. A esto se le llama "bloquear". Si no sale lo probamos al revés, hacemos primero las reacciónes de la tubulina y luego las de la actina y si sigue sin salir recurrimos a hacer los anticuerpos en especies distintas.
Si se usan anticuerpos comerciales a la dilución que aconseja la casa comercial no suele haber problema. Si la concentración es demasiado baja; no se da la reacción, hay pocos anticuerpos y no observamos nada.
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Si la concentración es demasiado altas se producen reacciones inespecíficas, el anticuerpo se pega a sitios del tejido de forma inespecífica. La concentración óptima es la concentración a la que se satura el sistema. Debemos determinar la concentración de unión específica óptima que depende del anticuerpo y del antígeno. Mezclamos el anticuerpo primario con el antígeno soluble. Cogemos el anticuerpo anti-actina lo incubamos con actina soluble de forma que los sitios de unión específica quedan bloqueados.
La reactividad cruzada es ver si un anticuerpo contra una determinada especie reacciona con un antígeno de otra especie distinta. Tenemos un anticuerpo anti-[actina de ratón] hecho en conejo y queremos ver si ese anticuerpo nos sirve también para detectar la actina de la ameba. Es aconsejable hacer un control para ver si la anti-[actina de ratón] funciona de forma específica con la actina de la ameba. Es decir que el anticuerpo estando bloqueado con la actina del ratón ha reaccionado con algo en la célula. Se pone en exceso. También se puede usar el 4-cloronaftol que de igual forma se oxida con el H por la peroxidasa.
Vesícula (biología celular)
Tiene el inconveniente de que es tóxico. El cloronaftol es soluble en alcohol, no se puede deshidratar y entonces montamos con glicerina que no se puede conservar durante mucho tiempo. El anticuerpo secundario debe estar en exceso por que favorece que la interacción sea con una sola valencia y que la segunda valencia quede libre para unir el PAP. Schwann propuso los siguientes principios: No todas las células de los organismos pluricelulares son iguales.
El microscopio electrónico tiene una resolución bastante buena. Cuadro donde tenemos representado distintos tamaños en metros. En estas situaciones debemos recurrir al microscopio electrónico. Imagen de microscopio óptico de campo claro transparencias. Microscopio de campo oscuro: Se amplia la imagen con dos lentes: El aumento de un microscopio no tienen nada que ver con la resolución de este. El límite de resolución D es la distancia mínima entre dos puntos distinguibles.
2. Localización de las proteínas en la célula
A mayor poder de resolución mejor microscopio. A menor límite de resolución mejor microscopio. Se calcula por la fórmula: Cuanto mejor sea la lente mayor cantidad de rayo van a coger y mejores son las lentes. Mide la curvatura de la luz sobre ese medio. Se usa aceite de inmersión que consigue una mayor resolución. El aire tiene un índice de refracción de 1.
La calidad de la lente y el medio de inmersión influyen en la resolución del microscopio. Lo que observamos el la luz transmitida a través de la muestra. El MO de contrate de fase es similar al de campo claro fotocopias.
La ventaja en que se observan las muestras vivas. Localización de moléculas en la célula. Color verde emisión FITC tiocianato de fluoresteina. Excitación es en UVA. Fotografía; microfilamento de actina teñidos con fluorocromos. Es parecido al de fluorescencia. Definición, calidad de imagen y resolución mucho mejor que con el MF.
También se llama de alto voltaje.
Localización de los componentes de la pared celular – Apuntes – Biología - Docsity
El haz de electrones barre la muestra y observamos los electrones que dispersa la muestra. Se dan en citología. Imagen con tinción negativa del virus del mosaico de tabaco fotocopias. El sombreado se hace igual que en barrido. Las zonas de sombra son zonas donde hay menos cantidad de metal y es menos electrodenso.
Observamos la topografía de la muestra por las sombras que crea el metal. La réplica del metal se hace sobre muestras con sombreado. La muestra se puede eliminar y observar solo la sombra o topografía. Por ejemplo; Se suele realizar para separar las dos monocapas de la membrana lipídica. Las dos monocapas se separan, las proteínas quedan en uno u otro lado de la monocapa. Incubamos la muestra con un isótopo radiactivo y luego se prepara para observarlo en un porta.
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Se hacen experimentos con isótopos radiactivos de "caza y pulso". Experimento para observar la tasa de renovación de la piel por autoradiografía. Unicamente las células en división van a incorporar el nucleótido y van a emitir radiactividad. Marcaje sin usar radiactividad , se usa también moléculas no radiactivas. Marcamos el ADN para saber que células se dividen. Este también es un experimento de "pulso y caza". Con las técnicas de anticuerpos podemos trabajar en MO y ME.
Existen distintas técnicas para la localización de los distintos componentes en la célula. Esta técnica se usa por ejemplo para observar las células caliciformes del intestino mucinas. Podemos ver si hay varios GAG y podemos saber cuantos hay. Pone de manifiesto grasas al disolverse en ellas.
En estas técnicas lo importante es el procesamiento de la muestra o tejido. También usa el reactivo de Schiffque pone de manifiesto aldehidos libres. Tinción verde de metilo-pironina.
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Por ejemplo en las células tumorales aparecen de nucleolos. Se usan para MO y ME. Anticuerpos son divalentes, poseen dos regiones de unión a antígenos que son iguales. Cada linfocito solo produce un tipo de cadena pesada y un tipo de cadena ligera. Otra posibilidad es realizar la reacción ag-ac antes de procesamiento.
Estas técnicas se usan para ME y MO. Para MO existen varias técnicas alternativas, para ME solo hay una técnica. También se llaman técnicas de inmunofluorescencia. Con la técnica directa necesitaríamos marcar los 10 anticuerpos primarios. Cuando observamos la muestra por el microscopio: Se usan para saber si la reacción ag-ac es específica Si se usan anticuerpos comerciales a la dilución que aconseja la casa comercial no suele haber problema.
Debemos hacer varias diluciones y ver cual es la apropiada. Es una técnica indirecta. La actividad peroxidasa se pone de manifiesto usando diaminobenudina DAB y H Esquema tomado de De Robertis et al. Su función principal es la síntesis del ARN ribosómico. En este tipo de cromosoma el segmento de ADN conocido como zona organizadora nucleolar, codifica para el ARN ribosómico.
Durante la división celular el nucleolo sufre cambios cíclicos, se desorganiza durante la profase y se vuelve a organizar en la telofase. Su tamaño es una medida de la intensidad de la síntesis proteínica celular. Cariolinfa , nucleoplasma o jugo nuclear. Es un gel constituido por proteínas estructurales. La cromatina debe su nombre al hecho de que se tiñe con cromóforos los que llevan el color , y auxocromos los que permiten cederlo. Mediante la condensación las secuencias de ADN se vuelven inaccesibles; así se opera la represión génica al impedirse las actividades de replicación y transcripción.
La condensación es la expresión morfológica de la inactivación de la cromatina. Imagen de Berg Cromosomas: En las células eucarióticas el ADN se encuentra fragmentado en varias porciones lineares que son los cromosomas. Son los portadores de la información hereditaria. Sólo son visibles durante la división celular, cuando aparecen como cuerpos cilíndricos que se tiñen intensamente Fig.
Imagen tomada de Moore et al. Recombinación de la información hereditaria en la reproducción sexual, por meiosis y singamia. Morfología En anafase y telofase presentan las siguientes partes: